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Bradford试剂蛋白定量是一种快速、即用型的总蛋白光学定量方法。在酸性条件下，考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465nm变为595nm，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA与Bradford试剂混合，测量在595nm处的吸收值，在由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。

• 蛋白质定量–UV法：1mL比色皿体积(线性范围：0μg/mL~100μg/mL)
  
  • 使用前先轻轻混匀Bradford试剂，然后取实验所需体积转移到另一个试管中，平衡至室温待用。
  • 根据下表用0.5mg/mL BSA溶液制备蛋白质标准溶液，一式三份。
    

    标准溶液	0.5mg/mL BSA(μl)	0.15M NaCl(μl)	每管标准液体积(μl)	每管BSA量(μg)
    Blank	0	100	100	0
    S1	5	95	100	2.5
    S2	10	90	100	5
    S3	15	85	100	7.5
    S4	20	80	100	10

  • 向每管标准液中加入1mL Bradford试剂并混合，室温下静置2min。
    
  • 用1mL比色皿测量595nm处的吸光度。绘制595nm处吸光度和蛋白质浓度的标准曲线。
    
  • 对于待测未知样品，使用样品代替BSA重复步骤1?3。通过标准曲线确定未知样品的浓度。
    
  • 蛋白质定量–酶标板法：96孔板(线性范围：0μg/mL~100μg/mL)
    
    • 使用前先轻轻混匀Bradford试剂，然后取实验所需体积转移到另一个试管中，平衡至室温待用。
• 根据下表用0.5mg/mL BSA溶液制备蛋白质标准溶液，一式三份。
  

  标准溶液	0.5mg/mL BSA(μL)	0.15M NaCl(μL)	每孔加标准液体积(μL)	每管BSA量(μg)
  Blank	0	50	20	0
  S1	2.5	47.5	20	0.5
  S2	5	45	20	1
  S3	7.5	42.5	20	1.5
  S4	10	40	20	2

  • 加入20μL标准液到96孔板的孔中。
    
  • 每个孔中再加入200μL Bradford试剂并混合，室温下静置2min。
    
  • 测量595nm处的吸光度。绘制595nm处吸光度和蛋白质浓度的标准曲线。
    
  • 对于待测未知样品，使用样品代替BSA重复步骤1?3。通过标准曲线确定未知样品的浓度。